绿色荧光蛋白转基因鼠咀嚼肌肌卫星细胞的分离、体外培养、鉴定及生物学特性的研究

目的 探讨绿色荧光蛋白(GFP)转基因鼠咀嚼肌肌卫星细胞体外培养及传代对咀嚼肌肌卫星细胞GFP荧光保持的影响,从而探讨GFP转基因鼠咀嚼肌肌卫星细胞移植入野生型小鼠后是否可以作为追踪细胞转归的有效方法.方法 取新生GFP转基因鼠面部咀嚼肌,分离出肌卫星细胞,体外进行原代和传代培养,建立GFP转基因小鼠肌卫星细胞系.通过倒置显微镜观察肌卫星细胞的形态、测定生长曲线等方法观察肌卫星细胞的增殖与分化能力;荧光显微镜观察GFP荧光的保持及表达;免疫细胞化学法对所获得的细胞进行骨骼肌肌动蛋白及结蛋白鉴定;DAPI进行细胞核的标记,检测培养细胞的纯度.结果 体外培养的咀嚼肌肌卫星细胞增殖速度快,荧光显微镜观察发现肌卫星细胞经传代后仍然保持其特有的GFP荧光表达.骨骼肌肌动蛋白单抗及抗结蛋白免疫细胞化学染色显示体外培养的咀嚼肌肌卫星细胞呈阳性表达.DAPI免疫细胞化学染色显示经分离及培养后肌卫星细胞纯度较高.结论 体外培养的GFP转基因鼠咀嚼肌肌卫星细胞有很强的增殖分化能力及良好的GFP荧光表达,能够作为追踪细胞来源及归宿的示踪细胞.