BLCAP基因cDNA的克隆及siRNA表达载体的构建

目的:克隆BLCAP基因cDNA并构建和鉴定针对于BLCAP基因的siRNA真核表达载体。方法:从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得BLCAP基因。将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,酶切及测序鉴定。将合成的siRNA核酸片段退火形成双链后连接到经BamHI和HindIII双酶切后的pSilencer4.1真核表达载体,命名为pSilencer4.1-B1以及pSilencer4.1-B2,并进行酶切及测序鉴定。脂质体法转染SOSP-9607细胞系,G418筛选以及RT-PCR验证构建的真核表达载体对目的基因的干涉情况。结果:经酶切及测序鉴定,所获得的目的片段序列BLCAP基因完全相符。重组质粒中含有与理论值相符的插入片段,其测序结果与设计序列一致。经脂质体法转染后pSilencer4.1-B2可明显抑制SOSP-9607细胞的BLCAP表达。结论:成功克隆了BLCAP基因并cDNA构建和验证了其siRNA真核表达载体。