敲低CD2相关蛋白的表达对足细胞黏附和胞质伸展功能的影响

目的 观察敲低足细胞CD2相关蛋白(CD2AP)表达对细胞黏附和胞质伸展功能的影响,并探讨其机制.方法 用RPMI 1640培养基33℃下培养小鼠未分化足细胞系,转染针对CD2AP的小分子干扰RNA(siRNA),设无特异靶位点的scrambing序列即controlsiRNA转染组作对照.48 h后将转染的足细胞制备成单细胞悬液,接种于预铺有Ⅳ型胶原蛋白的96孔板内,33℃下培养90 min后检测足细胞的贴壁率和细胞的伸展面积;流式细胞仪检测抑制CD2AP后足细胞的凋亡率以及在不同氨基核苷嘌呤霉素(PAN)刺激下足细胞的凋亡率;激光共聚焦显微镜下检测F肌动蛋白(F-actin)的分布变化;Westem印迹和免疫共沉淀检测nephrin蛋白的表达及其磷酸化水平.结果 转染CD2AP siRNA足细胞的黏附率为41.72%±6.07%,显著低于对照组64.46%±8.53%(P<0.05);细胞伸展的面积>200 μm2的比例(55.86%)亦显著低于对照组(73.61%).转染CD2AP siRNA后48 h足细胞的凋亡率高于对照组[(5.73±0.61)%比(3.26±0.45)%,P<0.05].100 mg/L的PAN能明显诱导足细胞的凋亡,减少足细胞的黏附率(P<0.05).敲低CD2AP的表达后足细胞F-actin的分布发生明显的变化,nephrin蛋白表达和磷酸化水平下降(P<0.05).结论 敲低CD2AP的表达使足细胞易于凋亡,影响细胞的黏附功能.足细胞骨架蛋白的紊乱和nephrin信号通路的抑制可能是足细胞黏附和伸展功能下降的机制.