牛源多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌双重PCR检测方法的建立与应用

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是栖息于牛呼吸道的2种常见细菌,可引发牛的呼吸道疾病,对养殖业产生一定经济损失.为提高这2种细菌所导致疾病的临床诊断效率,本研究根据Pm的Kmt1基因、Mh的Lkt基因序列分别设计了特异性引物,建立了 一种同时检测2种细菌的双重PCR检测方法.结果显示,建立的双重PCR方法对其他牛源细菌及病毒检测结果均为阴性,Pm、Mh病原基因组DNA的检测下限分别为1.57×105,1.98×106 copies/μL,表明该方法具有较好的特异性和敏感性.应用此双重PCR方法对宁夏地区118份临床样品进行了检测,结果显示Pm的检出率为57.63％(68/118),Mh的检出率为30.51％(36/118),混合感染检出率为24.58％(29/118),而且双重PCR检测结果与单一 PCR检测结果一致,表明该方法可用于临床检测.Pm和Mh 2种病原双重PCR检测方法的建立,为牛呼吸道疾病的临床诊断提供了 一种方便、快捷和准确的检测手段,具有一定的临床应用价值.