辽产龙胆ISSR-PCR反应体系的建立及遗传多样性分析

目的 为建立适合龙胆的ISSR-PCR反应体系,分析龙胆遗传多样性.方法 通过单因素试验和L16(45)正交试验相结合的方法,对影响PCR扩增效果的因素进行优化,采用极差分析法对结果进行分析,并利用优化后的条件基于ISSR-PCR对龙胆进行遗传多样性分析.结果 确定最佳反应体系:dNTPs 1(mmol/L),引物0.3(mmol/L),Taq DNA聚合酶3(U),Mg2+2.2(mmol/L),模板 DNA21(ng),PCR 扩增程序:94℃预变性 4 min,94℃变性 60 s,40～60℃退火 30 s,72℃延伸90s,循环35次,72℃延伸10 min,4℃保存.筛选出的8个引物共扩增出145个条带,其中多态性条带142条,多态性条带百分率98.01％,遗传相似性系数(GS)和遗传距离(GD)分别介于0.5525～0.9974和0.0027～0.6624,Nm=0.00148,说明龙胆基因流动性较低;UPGMA聚类和主成分分析将龙胆各分为三大类.结论 结果表明龙胆有较高的遗传多样性,遗传多样性与地理位置有一定的关系.