龙眼DlAGO1基因启动子的克隆与表达

为了解启动子在龙眼AGO1基因（DlAGO1）表达调控中的作用，根据龙眼基因组数据，以龙眼胚性愈伤组织的DNA为模板克隆DlAGO1基因的启动子序列，利用Methprimer、BPDG和PlantCARE在线软件对该序列进行生物信息学分析，将该启动子序列定向替换pCAMBIA1300载体的CaMV35S启动子，构建DlAGO1基因启动子与GUS基因的融合表达载体，瞬时转化本氏烟烟草叶片，进行GUS组织化学染色分析，并用不同浓度的赤霉素（GA3）、茉莉酸甲酯（MeJA）、水杨酸（SA）和脱落酸（ABA）喷洒烟草叶片，用实时荧光定量仪（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）分析不同浓度激素处理下GUS基因的相对表达情况.结果显示：分离克隆得到1 437 bp的DlAGO1基因启动子序列，该序列含有2个CpG岛分布区，2段核心启动子区域，还含有多种顺式元件，包括大量的TATA-box和CAAT-box核心元件以及GA3、MeJA、ABA、光、逆境、胚乳表达等响应元件；转基因烟草叶片被中度染色，ABA处理能够诱导DlAGO1启动子的活性.综上所述，龙眼DlAGO1基因启动子可以驱动下游GUS基因的表达，DlAGO1基因参与ABA等激素的响应，可能参与抗逆应答机制，结果可为进一步分析该基因的激素应答和抗逆机制奠定基础.（图7表1参31）