人参皂苷Rg1对大鼠坐骨神经冷冻保存后SCs活性及异体移植后神经再生的影响

目的:观察人参皂苷Rg1(G-Rg1)对冷冻保存大鼠坐骨神经施万细胞(SCs)生物学活性影响,探讨G-Rg1减轻冷冻保存大鼠坐骨神经SCs损伤的可行性.方法:取SD大鼠双侧坐骨神经,随机分为7组:新鲜组、空白组、G-Rg1组(1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4、1×10-3 mol·L-1 G-Rg1),除新鲜组神经外,将其余各组神经依次置于含0、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4、1×10-3mol·L-1 G-Rg1的冷冻保存液中液氮保存4周.原位末端标记法(TUNEL)/S100检测各组神经SCs凋亡,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测胱天蛋白酶(Caspase)-9、Caspase-3和主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达.将新鲜组和液氮保存4周的6组神经,置于37℃、5％CO2培养箱中培养7 d,Western b1ot检测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、神经生长因子(NGF)表达.用液氮保存4周的空白组和1×10-6、1×10-5、1×10-4mol·L-1 G-Rg1组坐骨神经,同种异体移植修复Wistar大鼠坐骨神经10 mm缺损(空白移植组,1×10-6、1×10-5、1×10-4mol·L-1G-Rg1移植组),同时设新鲜坐骨神经同种异体移植、同系移植对照组.移植术后16周,电生理检测肌肉复合动作电位(CMAP)和神经传导速度(NCV),神经丝(NF)-200免疫荧光单染、透射电镜和甲苯胺蓝染色分析再生神经组织学.结果:与新鲜组比较,空白组和G-Rg1各浓度组Caspase-9、Caspase-3表达、SCs凋亡明显升高(P＜0.05,P＜0.01),GDNF、NGF表达及MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达显著降低(P＜0.01).与空白组比较,1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4 mol·L-1 G-Rg1组 Caspase-9、Caspase-3 表达显著降低(P＜0.01);1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4 mol·L-1 G-Rg1 组 SCs凋亡降低(P＜0.05,P＜0.01),1×10-3 mol·L-1组升高(P＜0.05);1×1 0-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4 mol·L-1 G-Rg,组 GDNF、NGF表达升高(P＜0.05,P＜0.01),1×10-3 mol·L-1组降低(P＜0.01);G-Rg1各浓度组MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达差异无统计学意义.与1×10-7、1×10-3 mol·L-1 G-Rg1组比较,1×10-6、1×1 0-5、1×10-4 mol·L-1组 Caspase-3 表达、SCs凋亡降低(P＜0.05,P＜0.01),GDNF、NGF表达升高(P＜0.05,P＜0.01),MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达差异无统计学意义.移植术后16周,与同系移植组比较,空白移植组和G-Rg1移植组各组CMAP、NCV、髓鞘厚度、有髓神经纤维数显著降低(P＜0.01),1×10-6、1×10-4 mol·L-1 G-Rg1移植组NF200降低(P＜0.01);与同异移植组比较,空白移植组和G-Rg1移植各组CMAP、NCV、NF200、髓鞘厚度、有髓神经纤维数升高(P＜0.05,P＜0.01);与空白移植组比较,G-Rg1移植各组CMAP、NF200、髓鞘厚度、有髓神经纤维数升高(P＜0.05,P＜0.01);G-Rg,移植各组间,1×10-5mol·L-1移植组各项指标优于1×10-4、1×10-6 mol·L-1移植组(P＜0.05).结论:一定浓度的G-Rg1能维持冷冻保存的大鼠坐骨神经SCs生物活性,减轻神经冷冻保存损伤,异体移植后能促进受者神经再生.