基于CRISPR/Cas12b的乳粉中克罗诺杆菌属检测

Zhang Yixiang,Zhang Qingping,Li Linxian,Wang Liang,Yang Jielin,Liu Yang

Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology（2022）

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摘要

目的:开发一种基于CRISPR/Cas12b的克罗诺杆菌属分子检测方法.方法:以克罗诺杆菌菌属特异性基因序列为候选区域,针对区域设计扩增引物和向导RNA靶向序列,对其进行条件优化、特异性检测、反应体系优化,并用人工污染样品对体系的灵敏度、重复性进行验证.结果:该方法的特异性很好,方法的灵敏度达0.01 ng/μL,在人工污染样品中可检测到初始菌量<10 CFU/g的样品,方法检出限<10 CFU/100 g.对市售的51份乳粉样品进行检测,结果与传统国标方法一致.结论:建立的CRISPR/Cas12b方法可用于乳粉中克罗诺杆菌属的快速检测.

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