丹酚酸B激活自噬改善高磷诱导血管平滑肌细胞钙化的机制研究

目的:探讨丹酚酸B(Salvianolic acid B,SAB)改善高磷诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的作用及机制.方法:采用大鼠血管平滑肌细胞(A7r5)钙化体外模型,用细胞增殖与活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测SAB对细胞活力的影响;2.6 μmol·g-1高磷诱导VSMCs钙化,加入丹参多酚酸类化合物丹酚酸B、丹酚酸C(Salvianolic acid C,SAC)、迷迭香酸(Rosmarinic acid,RA)及细胞自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methylade-nine,3-MA,5 nmol·g-1),采用邻甲酚酞络合铜法及茜素红S染色检测细胞钙化程度;Western blot检测VSMCs钙化指标Runx2、OPN,自噬相关蛋白Beclin-1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ以及平滑肌收缩表型蛋白Calponin、SM22α的表达.结果:(1)钙离子浓度定量实验及茜素红染色实验显示SAB显著减轻高磷诱导的VSMCs钙化;(2)SAB浓度小于100 nmol·g-1以下时对VSMCs生存活力无明显影响,选择3,10,30 nmol·g-1 剂量进行后续实验;Western blot显示SAB明显降低VSMCs成骨样分化的分子标志物Runx2、OPN蛋白表达(P＜0.05),上调自噬标志物Beclin-1、LC3-Ⅰ/Ⅱ及VSMCs收缩表型标志物Calponin/SM22蛋白表达(P＜0.05).(3)SAB减轻高磷诱导VSMCs钙化的作用被自噬抑制剂3-MA阻断.结论:SAB可通过激活自噬抑制VSMCs钙化及向成骨样表型转化.