柑橘黄龙病常规PCR与qPCR检测体系的比较

为促进湖南省柑橘产业的可持续发展,加强对柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)的监测预警,根据黄龙病菌耐热性亚洲种"Candidatus Liberibacter asiaticus"(CLas)DNA不同保守区域设计了8组引物,分别采用常规PCR和qPCR进行检测,比较2种方法的灵敏度.结果表明:常规PCR供试的4组引物中,In1/In2引物未扩增出目的条带,其他3组引物的灵敏度由高到低排列依次为OI1/OI2>LB1/LB2=OL1/OL2,OI1/OI2这组引物对HLB菌的检测下限为98 pg/μL;qPCR供试的4组引物的灵敏度由高到低排列依次为LJ900f/LJ900r>Las-I-f/Las-I-r>HLBas/HLBr>Las-O-f/Las-O-r(根据可检测到最低浓度样本的Ct值排序),其中LJ900f/LJ900r这组引物对HLB菌的检测下限为9.8 pg/μL.另外,以湖南省郴州市汝城县农业局提供的11个柑橘HLB疑似样品为材料进行检测,引物LJ900r/LJ900f进行的qPCR检测,检出率为72.7％;引物OI1/OI2进行的常规PCR,检出率为45.5％;表明引物LJ900r/LJ900f结合qPCR方法对于HLB菌的检测效率更高.