微囊藻毒素-LR致人肝细胞恶性增殖中长链非编码RNA H19的表达及白藜芦醇的干预作用

目的 研究微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)致人肝细胞株WRL68细胞恶性增殖过程中长链非编码RNA H19的表达改变及白藜芦醇(resveratrol,Res)的干预作用.方法 将WRL68细胞随机分为溶剂对照(0.1％二甲基亚砜)组和25、100 nmol/L白藜芦醇组及MC-LR染毒组(10 nmol/L MC-LR染毒至25代)以及25、100 nmol/L白藜芦醇干预(白藜芦醇+10 nmol/L MC-LR)组,培养至25代.采用MTT法、平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力,采用实时荧光定量PCR测定H19的表达水平.结果 与溶剂对照组相比,MC-LR染毒不同时间WRL68细胞的存活率均上升,除第15代染毒24 h外,差异均有统计学意义(P<0.05);且MC-LR染毒72、96 h时第25代WRL68细胞的存活率高于15代细胞,差异均有统计学意义(P<0.05).MC-LR染毒第25代WRL68细胞的克隆形成率为114.6％,高于溶剂对照组(22.87％),差异有统计学意义(P<0.05).与溶剂对照组相比,100 nmol/L白藜芦醇处理24～96 h的第25代WRL68细胞的存活率下降,差异均有统计学意义(P<0.05);100 nmol/L白藜芦醇干预组处理24～96 h的第25代WRL68细胞的存活率低于MC-LR染毒组和25 nmol/L白藜芦醇干预组,差异均有统计学意义(P<0.05).而MC-LR染毒组和25 nmol/L白藜芦醇干预组染毒24～96 h的第25代WRL68细胞的存活率间比较,差异均无统计学意义(P>0.05).与溶剂对照组比较,MC-LR染毒组第10、15、20、25代WRL68细胞中H19的表达水平均较高,而100 nmol/L白藜芦醇组表达水平均较低,差异均有统计学意义(P<0.05);与MC-LR染毒组比较,100 nmol/L白藜芦醇干预组第10、15、20、25代WRL68细胞中H19的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P<0.05).随着处理时间的延长,MC-LR染毒组WRL68细胞中H19的表达水平呈上升趋势,而100 nmol/L白藜芦醇组和100 nmol/L白藜芦醇干预组WRL68细胞中H19的表达水平均呈下降趋势.第5代不同处理组的细胞中H19的表达水平无明显变化.结论 白藜芦醇可下调MC-LR染毒细胞中H19的表达水平并抑制MC-LR诱导的肝细胞恶性增殖.