用于粪便DNA检测的样本保存液制作和效果评估

目的:研发一种粪便样本保存液,可用于结直肠癌早筛人群粪便样本的常温保存与运输,且保存样本可用于后续粪便样本DNA检测.方法:改良配方,配制自制粪便样本保存液,将其用于常温保存粪便样本3和7 d,以及7 d内-80℃冻融一次后,采用琼脂糖凝胶电泳定性及实时荧光定量PCR(qPCR)检测人源看家基因β-globin的DNA拷贝数测试其阻遏DNA降解及微生物增殖的效能,并与RNAlater进行比较.自制粪便样本保存液应用于501例结直肠癌筛查人群,采用qPCR检测人源看家基因ATCB的DNA拷贝数,评估其对粪便DNA的保存效能.结果:自制保存液常温保存粪便样本3和7 d后琼脂糖凝胶电泳结果显示β-globin条带无明显变化,qPCR结果显示ΔCt≤0.2;采用自制保存液保存粪便样本并在7 d内-80℃冻融一次条件下,琼脂糖凝胶电泳结果显示β-globin条带无明显变化,qPCR结果显示ΔCt<1;与RNAlater相比,自制保存液保存粪便样本的条带更单一,ΔCt值变化更小.应用于结直肠癌筛查人群时,自制粪便样本保存液保存的样本合格率>70％,明显优于未使用保存液的样本合格率(<40％).结论:本研究开发了一种经济有效的粪便样本保存液,既不需要冷链运输,又能较长时间保存粪便DNA完整性并抑制微生物的增殖,为将其用于大样本量结直肠癌人群的早期无创筛查提供研究基础.