BRD4抑制剂通过BRD4/miR-106b-5p/P21分子轴特异性抑制野生型Kras分化型甲状腺癌发展

目的:探讨含溴结合域蛋白4(BRD4)抑制剂对野生型Kras分化型甲状腺癌(DTC)的影响及其机制。方法:选取DTC细胞株Kras WT TPC-1，构建基因突变型Kras G12D TPC-1细胞。采用CCK-8法检测BRD4抑制剂JQ-1对Kras WT TPC-1细胞增殖活力的影响。用0.2 μmol/L JQ-1处理Kras WT TPC-1细胞(JQ-1组)，另设阴性对照(NC)组，分别采用Transwell侵袭实验、流式细胞术检测JQ-1对Kras WT TPC-1细胞侵袭和凋亡的影响；检测JQ-1对BRD4、miR-106b-5p、P21表达的影响，以及P21抑制剂UC2288对P21、BRD4表达的影响。将Kras WT TPC-1细胞分为JQ-1+NC-OE组、JQ-1+p21-OE组(过表达p21)及JQ-1+p21-OE+miR-106b-5p mimic组(同时过表达p21和miR-106b-5)，检测各组细胞增殖、侵袭及凋亡情况。将TPC-1细胞分为Kras WT组、Kras WT+JQ-1组、Kras G12D组及Kras G12D+JQ-1组，检测各组细胞增殖、侵袭及凋亡情况。 结果:JQ-1以剂量和时间依赖方式抑制Kras WT TPC-1细胞的增殖活力。在NC组和JQ-1组中，细胞侵袭数分别为124.67±9.61、82.67±8.02，细胞凋亡率分别为(5.91±0.34)%、(10.33±1.10)%，差异均具有统计学意义( t＝5.812， P＝0.004； t＝6.653， P＝0.003)。JQ-1显著抑制Kras WT TPC-1细胞中BRD4及miR-106b-5p的表达并促进P21的表达。UC2288显著抑制P21表达，但对BRD4表达无显著影响。JQ-1+NC-OE组、JQ-1+p21-OE组及JQ-1+p21-OE+miR-106b-5p mimic组中，Kras WT TPC-1细胞24 h增殖活力分别为0.46±0.03、0.35±0.04、0.44±0.03( F＝8.720， P＝0.017)，JQ-1+p21-OE组较JQ-1+NC-OE组显著降低( P<0.05)；3组细胞侵袭数分别为83.00±9.17、56.67±6.03、79.67±10.07( F＝8.347， P＝0.018)，JQ-1+p21-OE组较JQ-1+NC-OE组显著减少( P＝0.009)；3组细胞凋亡率分别为(10.00±0.49)%、(15.39±1.14)%、(10.32±0.80)%( F＝37.764， P<0.001)，JQ-1+p21-OE组较JQ-1+NC-OE组显著增加( P<0.001)；JQ-1+p21-OE+miR-106b-5p mimic组与JQ-1+NC-OE相比，细胞增殖活力、侵袭数及凋亡率差异均无统计学意义(均 P>0.05)。在Kras WT组、Kras WT+JQ-1组、Kras G12D组及Kras G12D+JQ-1组中，24 h细胞增殖活力分别为0.50±0.05、0.39±0.04、0.68±0.08、0.64±0.05( F＝17.776， P<0.001)，与Kras WT组相比，Kras WT+JQ-1组增殖活力显著降低，Kras G12D组增殖活力显著升高(均 P<0.05)；各组细胞侵袭数分别为129.33±11.50、86.00±9.54、161.67±13.01、146.33±13.20( F＝22.598， P<0.001)，与Kras WT组相比，Kras WT+JQ-1组侵袭数显著降低( P＝0.002)，Kras G12D组侵袭数显著增加( P＝0.010)；各组细胞凋亡率分别为(6.17±0.50)%、(10.42±0.73)%、(3.43±0.47)%、(3.41±0.32)%( F＝119.170， P<0.001)，与Kras WT组相比，Kras WT+JQ-1组中细胞凋亡率显著增加( P<0.001)，Kras G12D组凋亡率显著降低( P<0.001)；Kras G12D+JQ-1组细胞增殖活力、侵袭数及凋亡率与Kras G12D组相比差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:BRD4抑制剂能够通过调节BRD4/miR-106b-5p/P21分子轴，特异性抑制Kras野生型DTC的发展，而对Kras突变型DTC肿瘤细胞的增殖、侵袭和凋亡无显著影响。