四季秋海棠BsMYB62基因酵母双杂交诱饵载体的构建及互作蛋白的筛选

[目的] 低温和高光均能引起四季秋海棠(Begonia semperflorens)叶片因合成积累花色素苷而变红.本研究从低温和高光处理四季秋海棠的转录组中筛选并克隆得到1个MYB转录因子基因并命名为BsMYB62 ,对其进行生物学信息分析,并从四季秋海棠cDNA文库中筛选出与其互作的蛋白.[方法] 设计BsMYB62引物,克隆BsMYB62 CDS区,利用生物信息学软件对BsMYB62基因序列及其编码蛋白序列分析.构建pGBKT7-BsMYB62酵母双杂交诱饵载体,对该诱饵载体进行毒性和自激活检测后, 用Mating法筛选BsMYB62的互作蛋白.[结果] BsMYB62基因的CDS区为801 bp(NCBI登录号:MT560845),编码266个氨基酸. pGBKT7-BsMYB62有自激活现象 ,对宿主酵母菌无毒性.在含45mM 3-AT的SD/-Trp-Leu-His-Ade培养基上能明显抑制BsMYB62蛋白的自激活.酵母双杂交结果显示与BsMYB62蛋白互作的蛋白有9类,分别是XTH9、LHB1B2、EBS7、PSI-F、UBE2、FDH、RBCS1A、FP6和BCA.[结论] 推测四季秋海棠BsMYB62蛋白与以上9类蛋白互作响应低温、高光胁迫.