番茄叶片酵母双杂交cDNA文库的构建及Pti互作蛋白筛选
Journal of Hefei University of Technology(Natural Science)（2021）
摘要
酵母双杂交技术作为检测蛋白质之间相互作用的有效手段,不仅能验证与已知蛋白质的相互作用,还可从文库中筛选与特定蛋白互作的未知蛋白.文章为研究番茄抗病相关蛋白Pti(Pto interaction protein)的生物学功能,筛选与其互作的蛋白,以未处理野生型番茄叶片、真空渗透法接种丁香假单胞杆菌番茄致病变种DC 3000(Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000,Pst DC3000)的感病株系prf3、抗性株系PtoR的植株叶片提取RNA,构建酵母双杂交文库.经检测,文库容量为1.25×107 CFU,阳性率大于95％,插入片段平均长度约1200 bp.通过构建Pti5重组诱饵载体并转化酵母菌,筛选与其相互作用的蛋白质.初步获得的Pti5互作的靶标基因,可用于进一步研究番茄抗病基因Pti的作用机制.
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