新型口腔细菌丝氨酸蛋白酶抑制剂Tannerpin的制备与结晶

目的 ·采用生物化学和结构生物学的方法,制备和结晶高纯度的新型口腔细菌丝氨酸蛋白酶抑制剂Tannerpin.方法 ·通过氨基酸序列分析,在牙周疾病相关细菌中筛选得到新型丝氨酸蛋白酶抑制剂,并将其命名为Tannerpin;构建融合表达载体pSUMO3-Tannerpin,将其转入大肠埃希菌BL21(DE3)系统进行诱导表达;采用镍离子亲和层析、SUMO特异性蛋白酶2(SUMO-specific protease 2,SENP2)酶切和凝胶过滤层析组合的纯化方案对Tannerpin进行分离纯化,并经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行验证;而后,对该纯化蛋白的结晶条件进行筛选及优化,并对其作用底物进行筛选.结果 ·SDS-PAGE结果显示,SUMO3-Tannerpin融合蛋白在大肠埃希菌中成功表达.利用纯化方案去除该蛋白的融合标签后,获得了相对分子质量约为43000的Tannerpin.通过结晶条件的初筛和优化,最终在20℃、pH=6.0、沉淀剂为28％聚乙二醇3350和8％Tacsimate的条件下获得了分辨率为1.7?的Tannerpin晶体.然而,未筛选到Tannerpin的作用底物.结论 ·成功制备了口腔细菌分泌的新型丝氨酸蛋白酶抑制剂Tannerpin及其晶体,或将为后续其结构分析及功能研究奠定基础.