大鼠血管内皮细胞siRNA转染条件的优化

目的:旨在优化siRNA转染大鼠血管内皮细胞的转染条件.方法:将o.75 μL和1.5 μL的脂质体Li-pofectamineTM 3000分别与20、40、60、80 nmol带荧光标记的FAMsiRNA组合,转染6、12、18、24 h后,用荧光显微镜计数阳性细胞率、MTT法检测各浓度条件下内皮细胞的存活率,筛选最优转染条件.结果:(1)转染12 h后,用荧光显微镜检测20、40、60、80 nmol各组,均可观察到绿色荧光(2)siRNA浓度为60 nmol/L,脂质体为1.5 μL的组合转染效率最高,继续增加siRNA的浓度,转染效率提高不明显.(3)转染时间超过24 h,各组细胞荧光减弱,细胞死亡率显著增加.结论:结果表明,以1.5 μL LipofectamineTM 3000与60 nmol/L的siRNA浓度组成转染混合物转染12h可以实现对大鼠血管内皮细胞高效转染并保持较高的细胞活性.