棉花GhV HA-A基因的原核表达及其重组大肠杆菌的抗逆性分析

为进一步验证棉花 GhV HA-A 基因的功能,该研究将棉花 GhV HA-A 基因构建到原核表达载体 pET28a上,利用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,同时对重组大肠杆菌BL21(pET28a-GhV HA-A)进行抗逆性分析.结果表明:(1)半定量RT-PCR分析发现,棉花幼苗液泡膜H+-ATPase基因(GhV HA-A)表达水平受脱水和高盐胁迫诱导.(2)将1872 bp长的编码区序列连接至原核表达载体pET28a上,成功构建了原核表达载体pET28a-GhV HA-A;SDS-PAGE电泳检测结果表明,在70 kD左右处有1条特异表达的蛋白质条带,与预期的目的产物大小一致.(3)重组菌BL21(pET28a-GhV HA-A)的抗逆性分析发现,重组菌对 PEG6000(20%)和NaCl(0.5 mol/L)的抗性明显高于对照菌株BL21(pET28a),表明 GhV HA-A 基因在大肠杆菌中表达后能够增强菌株的抗性.本研究结果为GhV HA-A 基因在植物抗逆基因工程中的应用提供了理论依据.