雷公藤内酯醇抑制小鼠肾小球系膜细胞表达IP-10及其机制研究

目的 探讨雷公藤内酯醇(TPL)对γ干扰素(IFN-γ)诱导的小鼠肾小球系膜细胞(MMC)表达γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)的影响及其调控机制,为TPL应用于狼疮肾炎的治疗奠定理论基础、提供实验数据.方法 将MMC随机分为空白组、IFN-γ激组、TPL干预组,用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测各组中IP-10 mRNA相对表达量;用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞培养上清液中IP-10分泌量;用蛋白印迹法(Western blot)检测各组中JAK/STAT1信号通路相关蛋白JAK1、JAK2、STAT1及其磷酸化蛋白p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1,以及IFN-γ受体(IFN-γRβ)和JAK/STAT1信号通路负反馈调节蛋白SOCS1的表达情况.结果1)MMC经不同质量浓度(2、4、8、10 ng/ml)TPL预处理2h后再加入IFN-γ同作用24h,IP-10 mRNA相对表达量与刺激组相比分别下降45.35％、65.40％、89.76％和94.72％(P均＜0.01);IP-10蛋白分泌量分别下降了5.21％ (P=0.531)、54.70％(P＜0.01)、87.17％(P＜0.01)和92.45％(P＜0.01).2)MMC经TPL预处理40min后再加入IFN-γ同作用20 min,JAK1、JAK2、STAT1蛋白磷酸化水平与刺激组相比明显降低(PJAK1＜0.01、PJAK2＜0.01和PSTAT1＜0.05).3)MMC经IFN-γ刺激后,IFN-γRβ蛋白表达水平与空白组相比明显增加(P＜0.01);经TPL干预后,IFN-γRβ蛋白表达水平与刺激组相比明显减少(P＜0.01).4)IFN-γ刺激MMC后,SOCS1蛋白表达水平与空白组相比小幅升高(P＜0.05);而经TPL刺激后,SOCS1蛋白表达与刺激组相比明显增加(P＜0.01).结论 TPL可能通过抑制JAK/STAT1信号通路,从而下调IFN-γ导的MMC表达IP-10;抑制IP-10表达,减轻或阻止炎症反应,有望成为TPL治疗狼疮肾炎的新靶点.