定点突变技术提高β-葡萄糖苷酶活性
Genomics and Applied Biology（2016）
摘要
β-葡萄糖苷酶(Bgl)是纤维素水解过程中的限速关键酶.提高Bgl的酶活,对于增强纤维素酶水解力有着十分重要的作用.本研究根据3D同源模建及分子对接,预测分析活性中心,利用定点突变做出针对性的改造.对来源于米曲霉的β-葡萄糖苷酶基因进行六个位点的定点突变,并将其在大肠杆菌中进行了突变基因的高效表达.经IPTG诱导后,分离纯化并进行酶学性质分析,获得酶活力提高的两个突变位点(Asn347Ser,Gly235Met),结果表明N347S和G235M位点的突变使酶的比活力显著提高,比原始酶活分别提高了43.1％和14.7％.这一研究为进一步提高β-葡萄糖苷酶活性研究提供一定的理论依据.
更多关键词
β-glucosidase,Site-directed mutagenesis,Enzymatic properties,Escherichia coli
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