硒代半胱氨酸合成蛋白基因表达对过氧化氢介导的内皮细胞EVC-304损伤的影响
Chinese Journal of Endemiology(2014)
摘要
目的:观察硒代半胱氨酸合成蛋白(SEPSECS)基因表达对过氧化氢(H2O2)介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304损伤的影响。方法体外培养人内皮细胞EVC-304,对细胞进行转染处理,分为对照组、SEPSECS低表达组、空载体转染组、SEPSECS高表达组,分别用0、200、400、600、800、1000μmol/L H2O2处理细胞6 h。转染后,用实时荧光定量PCR 法检测各组细胞SEPSECS基因表达,蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测各组细胞SEPSECS蛋白表达,流式细胞仪对各组细胞进行细胞周期检测。H2O2处理后,用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测各组细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果转染后对照组、SEPSECS 低表达组、空载体转染组、SEPSECS 高表达组 EVC-304细胞 SEPSECS mRNA 表达分别为1.03±0.24、0.43±0.11、0.98±0.27、1.61±0.13,SEPSECS 蛋白表达分别为1.00±0.26、0.51±0.10、1.12±0.38、1.51±0.20。其中SEPSECS低表达组SEPSECS mRNA、蛋白表达与对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.05);SEPSECS高表达组SEPSECS mRNA、蛋白表达与空载体转染组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。转染后,各组细胞周期未见明显改变(P 均>0.05)。经H2O2处理的各组EVC-304细胞MDA含量均随H2O2浓度的升高而升高。其中H2O2为800、1000μmol/L时,SEPSECS低表达组MDA含量[(15.8±0.5)、(19.6±1.5)μmol/L]明显高于对照组[(12.4±0.1)、(17.1±0.5)μmol/L,P均<0.05],SEPSECS高表达组MDA含量[(10.8±0.4)、(14.2±1.1)μmol/L]明显低于空载体转染组[(12.7±0.7)、(16.2±1.1)μmol/L,P均<0.05]。经H2O2处理的各组EVC-304细胞SOD含量均随 H2O2浓度升高而降低,且 H2O2为800、1000μmol/L 时,SEPSECS 低表达组SOD 含量[(7.7±0.4)、(2.4±0.3)μmol/L]明显低于对照组[(10.0±1.0)、(6.0±0.6)μmol/L,P均<0.05], SEPSECS高表达组SOD含量[(11.3±0.6)、(12.7±1.6)μmol/L]明显高于空载体转染组[(9.2±0.6)、(6.7±0.2)μmol/L,P均<0.05]。结论 SEPSECS基因表达对H2O2介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304具有保护作用,能够显著降低氧化应激所致的细胞损伤。
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关键词
selenocysteine synthase,hydrogen peroxide
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