二甲双胍在治疗剂量ADM诱导胰腺癌BXPC-3细胞发生EMT过程中的作用

目的:探讨二甲双胍在治疗剂量ADM诱导胰腺癌BXPC-3细胞发生上皮间质转化中的左右.方法:采用ADM体外刺激的方法培养胰腺癌BXPC-3细胞,于倒置显微镜下观察细胞形态学变化,构建EMT模型;根据实验目的将BXPC-3细胞分组,可分为BXPC-3-ctr组;BXPC-3-ADM组;BXPC-3-ADM+M组;BXPC-3+M组;MTT法检测二甲双胍对细胞增殖的影响;细胞划痕修复试验观察二甲双胍对细胞迁移的影响;RT-PCR及Western blot检测P-stat3,Twist,E-cadherin及Vimentin在mRNA和蛋白表达水平上的变化.结果:1.ADM能诱导胰腺癌BXPC-3细胞向间质细胞样细胞形态转化,使原本典型的连接紧密的上皮样细胞变得松散且形态极不规则,表现为类似成纤维状,较之普通BXPC-3细胞有典型的形态学变化.2.MTT显示ADM促进人胰腺癌Bxpc-3细胞增殖,二甲双胍抑制人胰腺癌Bxpc-3细胞增殖,且二甲双胍可抑制ADM对人胰腺癌Bxpc-3细胞的增殖促进作用(P<0.01).3.细胞划痕修复实验显示,ADM组与Ctr组相比,在划痕后24h及48h,细胞缺口均变小,而在划痕后48h,划痕缺口缩小的更为明显,而对照组划痕的缺口仍较宽;ADM+M组与ADM组相比,在划痕后24h及48h,ADM+M组划痕的缺口均比ADM组划痕的缺口大.M组与对照组相比,在划痕后24h及48h,M组划痕的缺口均比对照组大.4.RT-PCR检测结果显示,与对照组相比,ADM干预后的BXPC-3细胞E-cadherin mRNA表达水平显著降低,而与之对应的Twist及Vimentin mRNA表达明显增高(P<0.01);与ADM组相比,ADM+M组及M组BXPC-3细胞E-cadherin mRNA表达出现增高趋势,而Twist及Vimentin mRNA表达则出现降低现象(P<0.05).5.Western blot检测结果表明,ADM处理后细胞E-cadherin蛋白表达水平较对照组明显降低,而P-stat、Vimentin及Twist的表达水平均较对照组升高;二甲双胍干预48h后,ADM+M组及M组与ADM组相比较,上皮细胞相关标志分子E-cadherin的表达均出现升高趋势,而间质细胞相关标志分子P-stat、Twist、Vimentin的蛋白表达水平均显著降低.(P<0.01).结论:二甲双胍能明显抑制阿霉素诱导胰腺癌BXPC-3细胞的EMT进程.