益气养阴逐瘀方对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型体外抗炎活性的影响

目的:研究益气养阴逐瘀方对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞系RAW 264.7细胞炎症模型相关细胞因子表达及经典活化(M1)/选择性活化(M2)炎症表型转化的影响.方法:运用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同给药浓度的益气养阴逐瘀方对RAW 264.7细胞增殖情况的影响;利用LPS诱导RAW 264.7细胞,构建体外炎症模型,采用格里斯试剂法(Griess)检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的分泌量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清中M1/M2型相关炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β),一氧化氮合酶(iNOS),白细胞介素-10(IL-10),转化生长因子-β(TGF-β),精氨酸-1(Arg-1)的表达量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测M1型巨噬细胞标志基因TNF-α,IL-6,IL-1β,iNOS和M2型巨噬细胞标志基因IL-10,TGF-β,Arg-1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内相关蛋白TNF-α,IL-6,IL-1β,iNOS的表达.结果:MTT比色法显示,与空白组比较,益气养阴逐瘀方2.0g·L-1及以下时对细胞增殖无明显影响.Griess法显示,与空白组相比,LPS组NO释放量显著上调(P＜0.01);与LPS组相比,各给药组NO释放量均显著下调(P＜0.01).ELISA显示,与空白组相比,LPS组M1/M2型巨噬细胞相关炎症因子表达均显著上调(P＜0.01);与LPS组相比,益气养阴逐瘀方各给药组可明显下调M1型巨噬细胞促炎症因子表达(P＜0.01),对M2型巨噬细胞抗炎症因子无影响.Real-time PCR显示,与空白组相比,LPS组M1/M2型巨噬细胞相关mRNA表达显著上调(P＜0.01);与LPS组相比,益气养阴逐瘀方各给药组可明显下调M1型巨噬细胞促炎症因子基因表达(P＜0.05,P＜0.01),对M2型mRNA表达无影响.Western blot显示,与空白组比较,LPS组TNF-α,IL-6,IL-1β,iNOS蛋白的表达显著上调(P＜0.01);与LPS组相比,益气养阴逐瘀方各给药组TNF-α,IL-6,IL-1β,iNOS蛋白的表达均下调,且于2.0 g·L-下调最显著(P＜0.01).结论:益气养阴逐瘀方可以有效抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症.其诱导已经分化的促炎亚型M1型巨噬细胞向抗炎亚型M2型巨噬细胞转化不明显,其抗炎机制可能与通过抑制巨噬细胞向M1亚型方向极化从而发挥免疫调节作用,以减少NO,TNF-α,IL-6等相关炎症因子分泌相关.