竹节香附素A对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响

目的 研究竹节香附素A(Raddeanin A,RA)对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响,并初步探讨其作用机制.方法 采用不同浓度的RA(0.125~50.0μmol·L-1)处理HCT-116细胞24,48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力.RA(1.0,2.0,4.0μmol·L-1)干预后,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;采用Western Blot法检测细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达.选择低于凋亡浓度的RA(0.25,0.5,1.0μmol·L-1)作用于HCT-116细胞,采用细胞划痕实验和Transwell穿膜实验观察不同浓度RA对HCT-116细胞迁移的影响;采用铺有Matrigel胶的Transwell实验检测RA对HCT-116细胞侵袭能力的影响;采用RT-PCR法和Western Blot法检测RA对HCT-116细胞中MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达的影响.结果 RA干预24,48 h后的IC50值分别为5.967μmol·L-1和4.797μmol·L-1,且呈现浓度与时间依赖性.与空白对照组比较,RA 1.0,2.0,4.0μmol·L-1浓度组凋亡、坏死的HCT-116细胞明显增多(P<0.05,P<0.01);线粒体膜电位坍塌率分别为70.2%,74.4%和91.6%,差异均有统计学意义(P<0.01);细胞内ROS含量均显著增加(P<0.01),且呈现浓度依赖性;Cleaved caspase-3蛋白的表达水平随RA浓度的增加而显著提高(P<0.01).RA干预后与空白对照组比较,0.5,1.0μmol·L-1浓度组的细胞愈合率显著降低(P<0.01);RA 0.25,0.5,1.0μmol·L-1浓度组均能显著抑制HCT-116细胞的迁徙能力(P<0.01),均能显著抑制HCT-116细胞体外侵袭能力(P<0.05,P<0.01);RA 0.5,1.0μmol·L-1浓度组MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白相对表达水平均显著降低(P<0.05,P<0.01).结论 RA既能够有效抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,又能诱导该细胞的凋亡,可能与诱导细胞内ROS产生,导致线粒体膜电位坍塌,激活caspase信号通路有关.低于凋亡浓度的RA(0.25,0.5,1.0μmol·L-1)能明显抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭活性,可能与通过下调HCT-116细胞MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达有关.