健脾理气方通过下调NLRP3炎症小体的活化防治内毒素性急性肝损伤大鼠

目的:在网络药理学研究基础上,基于NLRP3炎性小体活化通路探讨健脾理气方对大鼠急性肝损伤(ALI)的防治作用.方法:(1)利用网络药理学技术预测分析健脾理气方通过抗炎和免疫调节治疗ALI的潜在靶点.(2)将雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组、模型对照组以及健脾理气方6.05、12.1、24.2 g/kg组,除正常对照组大鼠按体重一次性腹腔注射生理盐水外,其余各组大鼠给予腹腔注射600 mg/kg D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导ALI模型.造模后健脾理气方6.05、12.1、24.2 g/kg组立即分别灌胃相应体积药物,每日两次,给药间隔为12 h,连续给药2d.末次给药后立即取材,采用HE染色观察肝脏组织病理形态学的改变;生物化学法检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和γ-谷氨酰转肽酶(GGT)及肝脏组织中的Caspase-1活性,ELISA法检测血清炎症因子IL-1β、IL-18和NF-κB含量;Western Blot法检测肝脏组织中衔接分子(ASC)和炎性小体(NLRP3)蛋白表达水平的变化.结果:(1)网络药理学预测结果显示,健脾理气方可能通过NLRP3炎性小体等信号通路防治ALI.(2)与正常对照组相比,模型对照组大鼠肝脏组织损伤指数显著升高,血清ALT、AST、IL-1β、NF-κB含量明显升高,Caspase-1酶活性均明显升高,肝组织NLRP3和ASC蛋白表达水平明显上调(P＜0.05或P＜0.01);与模型对照组相比,健脾理气方12.1、24.2 g/kg组的大鼠肝脏组织损伤指数显著降低,12.1 g/kg组的血清ALT、AST、GGT和NF-κB含量明显降低,及肝组织NLRP3、ASC蛋白表达量均明显下调(P＜0.05或P＜0.01),24.2 g/kg组的血清GGT、IL-18和NF-κB含量明显降低,Caspase-1酶活性明显降低及肝组织NLRP3和ASC蛋白表达量明显下调(P＜0.05或P＜0.01).结论:健脾理气方12.1、24.2 g/kg组对D-GalN诱导的急性肝损伤均具有一定的保护作用,其中以12.1 g/kg组的健脾理气方防治的效果最佳;其作用的分子机制可能在于下调NLRP3炎症小体的活化;这一结果与网络药理学的预测结果相一致.