健脾解毒方经活性氧途径诱导人肝癌HepG2细胞自噬性死亡

目的:探讨健脾解毒方对肝癌HepG2细胞增殖及自噬的影响,并初步探讨其可能机制.方法:用不同浓度的健脾解毒方(0、2、3、4 mg/mL)干预HepG2细胞,或分别用自噬抑制剂3-MA或活性氧(ROS)抑制剂NAC预处理后,CCK8法检测细胞增殖;GFP-LC3B质粒转染及透射电镜观察细胞自噬情况;Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-Ⅰ、LC3-Ⅱ的表达;DCFH-DA探针标记细胞,流式细胞术检测胞内ROS产生.结果:健脾解毒方能显著抑制HepG2细胞增殖(P＜0.01),且其作用呈浓度及时间依赖性;健脾解毒方能诱导HepG2细胞内自噬体形成,使自噬相关蛋白Beclin-Ⅰ和LC3-Ⅱ表达上调,介导胞内ROS产生(P＜0.05或P＜0.01);抑制自噬或ROS均可使健脾解毒方的细胞毒作用显著减弱(P＜0.05).结论:健脾解毒方可通过诱导自噬性死亡抑制肝癌HepG2细胞增殖,ROS参与自噬的诱导.提示杀伤性自噬是一种有效的抗肿瘤机制.