基于亲和层析方法研究栀子苷的药物靶标

目的:运用亲和层析方法初步探索栀子苷的特异结合蛋白.方法:采用环氧氯丙烷(Epichlorohydrin,ECH)作为活化试剂对琼脂糖凝胶进行环氧基修饰,通过偶联栀子苷与环氧活化的琼脂糖凝胶(epoxy activated Sepharose CL-6B,EAS6B),制备以栀子苷为配基的亲和介质,以高效液相色谱法验证其偶联.利用栀子苷-EAS6B亲和介质,从小鼠脑组织总蛋白中筛选特异结合蛋白.结果:优化偶联条件后,得到最佳的活化反应条件:15％ECH、0.8 mol/L NaOH于37℃反应3h,环氧基密度达到122 μmol/mL,琼脂糖凝胶亲和介质的偶联量为19.53％,偶联率为17.08 μnol/mL.从小鼠脑组织总蛋白中筛选得到3个栀子苷特异结合蛋白的条带,经质谱鉴定,发现主要是由热休克蛋白、脑酸溶性蛋白和谷氨酰胺合成酶等组成.结论:确立了琼脂糖凝胶环氧活化的最佳条件,制备了栀子苷-EAS6B亲和介质并应用其筛选出栀子苷的结合蛋白.