金黄色葡萄球菌肠毒素SEC3抑制剂的筛选及活性鉴定

目的 从噬菌体随机12肽库中筛选出金黄色葡萄球菌SEC3抑制剂并鉴定其活性. 方法 用纯化的重组的金黄色葡萄球菌SEC3包被酶标板,按吸附-洗脱-扩增的淘洗过程对噬菌体随机12肽库进行3轮筛选;用竞争ELISA法观察单个噬菌体克隆的竞争抑制效应,评价其活性. 结果 噬菌体3轮筛选的投入产出比逐轮升高,回收率从4.5×101升高至6.3×10-4,升高140倍,提示具有良好的富集效果;与阴性对照(未加噬菌体)相比,随机挑选的8个噬菌体克隆(A1～A8)竞争抑制率为10.6％～38.3％,差异有统计学意义(t值为9.0～23.5,P＜0.05),其中A1平均竞争抑制率最高,为(30.5±7.4)％,A5的平均竞争抑制率最小,为(16.4±4.7)％.以噬菌体滴度对数值为x轴,以克隆噬菌体各滴度对应的平均竞争抑制率为y轴,绘制竞争抑制曲线,其回归方程为Y=2.7943X-4.7733,相关系数r=0.935,决定系数R2 =0.8727.在噬菌体滴度在108～1012 pfu范围内,随着噬菌体滴度的增高,其抑制率也增高,且克隆噬菌体滴度在1011 pf或1012 pfu的竞争抑制率最高. 结论 用纯化的SEC3从噬菌体随机12肽库中筛选的SEC3抑制剂具有一定的竞争抑制活性,而且竞争抑制活性随着噬菌体滴度的增高而增强.