基于CRISPR/Cas9技术的 MAVS和 NFκB1基因敲除MDCK细胞系的构建及初步鉴定
Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology(2020)
Abstract
目的:构建线粒体抗病毒信号(mitochondrial antiviral signaling,
MAVS)和核因子
κB1(nuclear factor
kappa B1,
NFκB1)基因敲除的犬肾细胞系(Madin-Daby canine kidney cells, MDCK),对细胞系的生长特性、流感病毒(influenza virus, Flu)的增殖特性进行初步鉴定。
方法:采用CRISPR/Cas9技术,将MDCK细胞的
MAVS和
NFκB1基因敲除,获得稳定的敲除细胞系。接种Flu并检测培养上清中病毒的血凝(hemagglutinination, HA)滴度和TCID
50滴度,与野生MDCK细胞进行比较。
结果:获得2株稳定敲除的MDCK细胞系MDCK-
MAVS-和MDCK-
NFκB1
-,与野生MDCK细胞同样为贴壁的上皮样细胞。接种Flu后,2株敲除细胞系测定的病毒HA滴度与野生细胞相比无明显差异,TCID
50分别比野生MDCK细胞系提高了9.5倍和10倍,其差异有统计学意义(
P=0.0316)。
结论:本研究构建的2株基因敲除细胞系MDCK-
MAVS-和MDCK-
NFκB1
-能够提高Flu的感染力,为Flu的分离培养提供了新的候选细胞系。
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Key words
Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR- associated 9 (Cas9),Madin-Darby canine kidney cell (MDCK),Mitochondrial ant
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