全反式维甲酸对人结肠癌LoVo细胞化疗药物敏感性及Survivin基因表达的影响
CHINESE JOURNAL OF BIOMEDICAL ENGINEERING(2011)
摘要
目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对人结肠癌LoVo细胞化疗药物敏感性及Survivin表达的影响,为ATRA的临床应用提供理论依据.方法 应用流式细胞仪检测经不同浓度(10-5、10-6、10-7mol/L)的ATRA作用不同时间(24、48、72 h及第5、9、15天)后结肠癌LoVo细胞的周期变化.将细胞分为ATRA组(10-6mol/L)和对照组(RPMI1640培养液常规培养),每组中分设不同浓度的5-氟尿嘧啶(5-FU,0、2、4、6 g/L)和丝裂霉素(MMC,0、200、400、600 mg/L)组,MTT法测定其活性,用以分析细胞对化疗药物敏感性变化,并利用交互效应分析药物之间的相互作用.应用吖啶橙(AO)和溴化乙锭(EB)染色观察对照组(RPMI1640培养液)、ATRA组(10-6mol/L)、5-FU组(4 g/L)、MMC组(400 mg/L)及ATRA(10+mol/L)+5.FU(4 g/L)组、ATRA(10-6 mol/L)+MMC(400 mg/L)组的细胞凋亡情况.免疫荧光技术测定对照组(RPMI1640培养液)和ATRA组(10-6mol/L)细胞中Survivin基因的表达.结果 与对照组相比,不同浓度ATRA作用24 h后,Go-G1期细胞比例增加,48 h后达最高值,其后逐渐下降,而S期+G2.M期细胞比例则下降,48 h后达最低值,其后逐渐升高;在相同时间点,10-6mol/LATRA作用最明显.与对照组相比,10-6mol/LATRA降低了细胞存活率(P<0.05).对照组各浓度的5-FU细胞存活率明显高于ATRA组(均P<0.05).而对照组加入不同浓度MMC后,在200 mg/L MMC浓度水平,细胞存活率低于ATRA组(0.72±0.02比1.03±0.13,P<0.05),但在400、600 mg/L MMC浓度水平,两组差异无统计学意义(0.52±0.05比0.39±0.02,0.36±0.02比0.36±0.01,均P>0.05).10-6西mol/L ATRA分别与5-FU(2、4、6 g/L)、MMC(200、400mg/L)存在正交互效应.与对照组、ATRA组、5-FU组、MMC组相比,荧光显微镜下ATRA+5-FU组、ATRA+MMC组的细胞出现明显的体积缩小,核固缩,染色质浓集并形成凋亡小体.与对照组相比,10-6mol/L ATRA作用48 h后细胞Survivin基因表达下降(33.33%比27.96%,P<0.05).结论 ATRA增加了结肠癌LoVo细胞对5-FU及MMC的敏感性,并诱导了细胞的凋亡,作用机制可能与通过抑制Survivin基因的表达有关.
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关键词
Tretinoin,Colonic neoplasms,Antineoplastic agents,Drug sensitivity,Survivin gene
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