肝细胞生长因子基因转染缺氧培养骨髓间充质干细胞凋亡相关蛋白的影响

背景：研究已证实肝细胞生长因子基因转染可提高骨髓间充质干细胞移植效果，但其具体机制尚未完全明确。目的：探讨肝细胞生长因子基因转染对缺氧、无血清培养骨髓间充质干细胞c-Met、Bax、Bcl-2、Caspase-3表达及细胞迁移的影响。
　　方法：①贴壁法体外分离、扩增培养骨髓间充质干细胞。用x-gal染色法检测含肝细胞生长因子基因的重组腺病毒对骨髓间充质干细胞的感染率。②在缺氧、无血清条件下培养0，3，6，9，12 h，采用RT-PCR及Western blot测定骨髓间充质干细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。③骨髓间充质干细胞缺氧、无血清培养6 h，采用RT-PCR及Western blot测定HGF、c-Met、Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。④细胞迁移划痕法观察缺氧、无血清培养6h后肝细胞生长因子转染对骨髓间充质干细胞迁移的影响。
　　结果与结论：①重组腺病毒对骨髓间充质干细胞的转染率与病毒感染复数具有量效关系，病毒感染复数为150时细胞的感染率达96.4%。②随着缺氧时间的延长骨髓间充质干细胞Bax、Bcl-2表达逐渐升高(P <0.05)，缺氧6 h时Bax/Bcl-2比值、Caspase-3蛋白达到最小(P<0.05)。③缺氧及无血清培养6 h后，与对照组及空载体组相比，Ad-HGF组HGF、c-Met、Bcl-2表达增高，而Bax、Caspase-3表达下降(P<0.05)，对照组与空载体组差异无显著性意义(P>0.05)。④Ad-HGF组骨髓间充质干细胞在缺氧培养6 h后，迁移率比对照组及空载体组高(P <0.05)。结果表明肝细胞生长因子基因转染上调缺氧、无血清培养骨髓间充质干细胞c-Met、Bcl-2表达，下调Bax、Caspase-3表达，增强骨髓间充质干细胞迁移能力。