三维共培养体系促进去分化的软骨细胞再分化的实验研究

目的 探讨海藻酸钠水凝胶三维共培养体系对去分化的软骨细胞再分化的影响.方法 将第1代(P1)软骨细胞及第4代(P4)软骨细胞分别与ATDC5按3:1的比例在海藻酸钠水凝胶内进行三维共培养,即AP1组及AP4组.另建立单纯P1、P4及ATDC5的三维培养体系,即P1、P4及ATDC组,全部以软骨诱导液为培养基,提供外源性转化生长因子(TGF-β3).培养28 d后,通过Q-PCR检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、蛋白聚糖基因的表达情况,组织学染色观察等手段,比较各组的Ⅱ型胶原及蛋白聚糖基因的表达水平,结果以Bonferroni检验法进行统计学分析.结果AP4组中Ⅱ型胶原及蛋白聚糖基因的表达明显上调,且与P1、P4组的差异有统计学意义(Ⅱ型胶原:F=38.41,P<0.01;蛋白聚糖:F=5,P<0.01),且在组织学染色上也能观察到相关蛋白产物明显沉积.结论 三维共培养体系能让去分化的软骨细胞重新出现其特有的表型,其机制涉及细胞因子及细胞直接接触等方面.