α3神经型尼古丁受体基因上调对SH-SY5Y细胞突触素水平的影响

目的 构建使α3 nAChR基因上调的重组质粒α3 nAChR-pcDNA3.1并转染至神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),研究α3 nAChR基因上调对细胞突触素(SYP)水平的影响.方法 设计α3 nAChR上下游引物,通过逆转录PCR的方法获取人α3 nAChR特异核苷酸序列,并将其克隆到质粒载体pcDNA3.1上,构建重组质粒α3 nAChR-pcDNA3.1;瞬时转染至SH-SY5Y细胞后,用Real-time法和蛋白免疫印迹法分别α3 nAChR 及蛋白水平,并检测上调细胞中SYP mRNA和蛋白水平的变化.结果 成功构建了使α3 nAChR基因上调的重组质粒α3 nAChR-pcDNA3.1;将 α3 nAChR-pcDNA3.1质粒转染到 SH-SY5Y细胞后,与空载质粒组及正常对照组相比,α3 nAChR mRNA及蛋白表达水平分别增加了422%和106%(P<0.05);SYP mRNA及蛋白表达水平分别增加了115%和43%(P<0.05).结论 α3 nAChR表达的上调可使细胞SYP的表达增加,说明了α3 nAChR与SYP密切相关,在AD的发生中可能起着重要作用.