Tim-3调控T细胞IL-2表达的机制研究

目的 探究T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)对白细胞介素-2(IL-2)的调控作用及机制.方法 通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、流式细胞术(FACS)以及实时定量荧光聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测T细胞活化后,Jurkat高表达Tim-3(JurkatTim-3-high)与低表达Tim-3(JurkatTim-3-low)细胞系中IL-2的基因转录及蛋白表达水平;使用中和性抗人Tim-3抗体阻断Jurkat细胞系中Tim-3功能,ELISA及RT-PCR方法检测IL-2蛋白分泌及转录水平变化;通过Western蛋白免疫印迹法检测Tim-3对IL-2表达调控相关分子[包括蛋白激酶C(PKC)β1及核因子(NF)-κB亚基P65]的磷酸化的影响.结果 ELISA、FACS和RT-PCR结果均表明,Tim-3抑制IL-2的表达,使用抗人Tim-3抗体阻断后,IL-2的表达上调;Western印迹结果显示,与JurkatTim-3-low细胞相比,JurkatTim-3-high细胞中蛋白激酶PKCβ1及NF-κB亚基P65的磷酸化受到明显抑制.使用中和性抗人Tim-3抗体阻断后,PKCβ1及P65的磷酸化明显增强.结论 Tim-3对IL-2的基因转录及蛋白表达起负性调控作用,并且可能是通过抑制NF-κB(NF-κB/p65)及PKCβ1的磷酸化,从而抑制IL-2的产生.