人BMP-2体外定向诱导犬BMSCs向成骨方向分化的实验研究

目的：通过将犬骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）建立体外培养体系，运用人骨形态发生蛋白-2（bone morphogenetic protein-2，BMP-2）体外定向诱导分化为成骨细胞，为后期建立骨组织工程提供种子细胞。方法提取比格犬BMSCs，全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法行体外分离培养，每日观察细胞生长变化。将生长形态良好的第3代BMSCs分成两组，实验组加入200 ng/ml人BMP-2的含血清培养基对其进行成骨诱导培养，对照组只用含血清的完全培养基培养，于诱导3周后行碱性磷酸酶染色、诱导4周后行茜素红染色与Von-Kossa染色以鉴定分化的成骨细胞。结果诱导3周后实验组碱性磷酸酶染色示细胞胞质内黑色颗粒阳性表达，对照组为阴性；诱导4周后实验组茜素红染色以及Von-Kossa染色均呈钙结节阳性表达，对照组均为阴性。实验组染色结果都表达成骨细胞的特性。结论体外分离培养的比格犬BMSCs，在诱导剂人BMP-2的作用下可以向成骨细胞定向分化。