PI3K/Akt通路在血管内皮细胞急性低氧损伤中的应激性调控研究

[目的]通过建立体外细胞低氧模型,观察PI3K/Akt通路在血管内皮细胞急性低氧损伤中的应激性表达调控.[方法]选取对数生长期的血管内皮细胞株,随机分为:常氧对照组、低氧模型组、低氧+PI3K/Akt阻断剂组.利用数控三气培养箱建立急性低氧损伤模型(95％N2-5％CO2),通过MTT法检测各组血管内皮细胞的生长活力,利用生化显色法检测各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的外漏量,检测各组细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,应用Western blotting技术检测各组细胞中Akt与磷酸化Akt蛋白(pAkt)的表达水平.[结果]与常氧对照组比较,低氧模型组细胞的生长活力显著下降(P＜0.01),LDH外漏量显著增多(P＜0.01),SOD与CAT活性显著降低(P＜0.01),MDA含量显著升高(P＜0.01),Akt表达水平无显著差异(P＞0.05),pAkt表达水平显著升高(P＜0.01);而与低氧模型组相比,在低氧前加入PI3K/Akt通路抑制剂,可以显著抑制pAkt的应激性表达(P＜0.01),并进一步降低血管内皮细胞的生长活力(P＜0.01),增加LDH外漏量(P＜0.05),下调SOD与CAT活性(P＜0.05),升高MDA含量(P＜0.05).[结论]急性低氧促进PI3K/Akt通路的激活,对抗低氧诱导的氧化损伤,PI3K/Akt通路的应激性调控可能与低氧细胞的自我保护机制有关.