黄芩素对多发性骨髓瘤细胞系凋亡及Cereblon基因和蛋白表达的影响
Guangdong Medical Journal(2017)
摘要
目的 观察黄芩素对多发性骨髓瘤(MM)细胞系凋亡及Cereblon(CRBN)基因和蛋白表达的影响,探讨CRBN在黄芩素诱导MM细胞凋亡中的作用.方法 应用Annexin-V染色,流式细胞术分析黄芩素和黄芩素联合来那度胺对MM细胞系凋亡的作用;应用RT-PCR技术检测MM细胞系CRBN基因的表达;应用蛋白印迹检测MM细胞系CRBN蛋白的表达,并设置空白对照.结果 黄芩素能够诱导U266细胞凋亡,在黄芩素浓度为40μmol/L时,随着处理细胞时间的延长(24、48、72 h),凋亡率分别为6.11%、11.9%、16.7%;在处理RPMI 8226细胞72 h后,与单用黄芩素或来那度胺相比,黄芩素(40μmol/L)与来那度胺(40μmol/L)联合应用,对MM细胞系的増殖具有更强的抑制作用,来那度胺诱导的细胞凋亡率为4.27%,黄芩素诱导的细胞凋亡率为15.9%,两者联合应用,细胞凋亡率为57.5%;RT-PCR检测结果显示:黄芩素能诱导U266细胞CRBN基因表达,且呈浓度和时间依赖性,在24 h时,与对照组相比,黄芩素浓度分别为10、20和40μmol/L时,CRBN基因的上调倍数分别为(2.246±0.068)、(2.399±0.178)和(3.591±0.061)(P值分别为0.003、0.009和0.001);在浓度为40μmol/L时,与对照组相比,黄芩素在不同的作用时间(6、12和24 h),诱导CRBN上调倍数分别为(2.372±0.079)、(2.494±0.189)和(3.228±0.151)倍(P值分别为0.002、0.008和0.002);蛋白印迹结果表明,黄芩素还能诱导U266和RPMI 8226两细胞系CRBN蛋白的表达.结论 黄芩素通过上调CRBN的基因和蛋白表达,増强MM细胞对来那度胺诱导凋亡的敏感性,为黄芩素将来应用于临床克服MM患者对来那度胺的耐药性提供依据.
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