雷帕霉素诱导Ana-1细胞自噬杀伤黑素化马尔尼菲青霉

目的 探究巨噬细胞吞噬黑素化马尔尼菲青霉(PM)后的自噬水平变化,并探究雷帕霉素通过诱导巨噬细胞自噬杀灭该菌的可行性.方法 采用含多巴培养基培养获得酵母相黑素化PM,蛋白质印记法检测黑素化及常规PM刺激后Ana-1细胞Ⅱ型微管相关蛋白1轻链3(LC3 Ⅱ)的表达水平,并检测雷帕霉素预处理后Ana-1细胞LC3 Ⅱ的表达水平,继而采用免疫荧光法显示LC3 Ⅱ与黑素化PM在细胞内的定位;通过菌培养测算雷帕霉素的直接抗菌作用,并检测有无雷帕霉素预处理的Ana-1细胞对黑素化PM的杀菌效能.结果 Ana-1细胞吞噬黑素化PM后自噬水平无明显变化(P＞0.05),而雷帕霉素处理后染菌的Ana-1细胞LC3 Ⅱ表达水平明显升高(P=0.009,P＜0.05),并且菌体与LC3蛋白呈共定位关系.雷帕霉素处理后Ana-1细胞与黑素化PM共孵育3h(P=0.026)和6h(P=0.014)后菌存活率明显降低(P＜0.05),而相同条件下单纯的Ana-1细胞或雷帕霉素无明显杀菌作用.结论 黑素化PM抑制巨噬细胞的自噬活化,雷帕霉素可通过诱导自噬提高巨噬细胞对该菌的杀菌效能.