马铃薯RSAP-PCR反应体系的建立及优化

本研究以云南地方品种羊角洋芋为材料,采用单因素与L16(45)正交设计相结合的方法,对影响RSAP-PCR反应体系的Mg2+浓度、Taq酶量、dNTPs浓度、模板DNA量和引物浓度进行优化,综合选取得到最佳反应体系.结果表明:马铃薯RSAP-PCR最佳反应体系为:20 μL体系中,Mg2+浓度4.00 mmol/L,Taq酶2.00U,dNTPs浓度0.45 mmol/L,模板DNA 60 ng,引物浓度0.50 mmol/L.应用该体系对退火温度进行优化,得到RSAP的两步最佳退火温度分别为35℃和51℃.利用10个马铃薯品种验证所得PCR体系,证明该体系稳定,可靠,重复性好,可为今后利用RSAP分子标记评价马铃薯的遗传多样性、开展品种选育、构建遗传图谱提供技术支持.