桑枝1－脱氧野尻霉素的提取及其含量与α－葡萄糖苷酶抑制活性的相关性分析

【目的】1－脱氧野尻霉素( DNJ)是一种降血糖功效较好的天然活性产物，在桑树中的含量相对较高。对超声－微波联合辅助提取桑枝中 DNJ的工艺进行优化，以获得较高提取率；同时，分析桑枝水提物中 DNJ 含量与α－葡萄糖苷酶抑制活性的相关性，以获得其中 DNJ对α－葡萄糖苷酶抑制活性的贡献程度。这可能为桑枝中DNJ的提取、分离及桑枝α－葡萄糖苷酶抑制剂的极性分布等研究提供一定的依据。【方法】利用9－芴甲氧羰酰氯对 DNJ进行衍生化，弥补其本身不具有紫外吸收特性的缺点，利用高效液相色谱在254 nm波长下进行定性定量检测；单因素试验分别求得微波处理时间、超声波处理时间和液料比的优化范围，以响应曲面法对超声－微波联合辅助提取 DNJ三因素的平方和、均方、P 值、R2等参数进行优化，获得二次多项回归方程和相应的最优提取条件；在此基础上利用系统溶剂法萃取浓缩的水提物，计算石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水4种极性部分的α－葡萄糖苷酶抑制活性(通过酶标仪在415 nm波长处测定α－葡萄糖苷酶对4－硝基苯－α－D 吡喃葡萄糖苷的分解率来计算)与 DNJ的含量，并对二者之间的关系进行分析。【结果】用0.05 moL·L －1的盐酸溶液提取，微波处理9.60 min、超声波处理30.89 min和液料比46.47 mL·g －1时达到最优条件，此时 DNJ的产率为0.205%，结果检验值与优化值的拟合率达99.27%，相对于对照组增长了10.86%；正丁醇部分DNJ的含量最高，乙酸乙酯次之，水部分仍含有少许，石油醚部分为零，说明正丁醇的萃取效果较好；正丁醇部分的抑制曲线趋势与乙酸乙酯部分相近，水部分与石油醚部分相近，且各萃取部分之间的 IC50都差异显著，结合 DNJ的含量分布，说明桑枝中具有 α－葡萄糖苷酶抑制活性的物质间有一定的极性差异；根据各萃取部分中 DNJ的含量，从其半抑制浓度中换算出 DNJ的浓度，即为“其中DNJ的浓度”，正丁醇部分“其中DNJ的浓度”与DNJ标准品的IC50差异不显著，说明此部分α－葡萄糖苷酶抑制活性物质几乎尽是DNJ；水部分虽含有少量的DNJ，但其活性却相对更小，可能其中含有具备提高α－葡萄糖苷酶活性的多糖等物质，或一些糖类等黏性物质影响了DNJ与酶的结合；乙酸乙酯部分“其中 DNJ的浓度”比 DNJ标准品的IC50小，可能是由于此部分含有个别黄酮类等对DNJ具有活性增强/协同作用，或其中含有一些游离生物碱、香豆素或黄酮苷元等物质具备相似活性；石油醚部分不含DNJ，却有一定的α－葡萄糖苷酶抑制活性，说明桑枝中含有一些极性小的脂溶性化合物具备α－葡萄糖苷酶抑制活性。【结论】微波处理初步粉碎的新鲜桑枝，既有干燥作用又有辅助提取效果，而后用超声波辅助浸提可提高DNJ的提取效率；桑枝中主要的α－葡萄糖苷酶抑制是DNJ，除此外还可能含有一些极性相对较小的活性成分。这些结果有利于桑枝DNJ及其他降血糖活性成分的进一步研究。