蜱传脑炎病毒(TBEV)SYBR GreenⅡ荧光定量PCR检测方法的建立

根据TBEV NS5基因序列设计特异性引物,构建标准品,优化荧光定量PCR的反条件和反应体系,将标准品按108 ～101拷贝/μL梯度稀释,建立标准曲线.同时分析其敏感性和特异性,并对155份牛血清样品进行检测验证.结果 显示,建立了TBEV基于SYBR GreenⅡ荧光定量PCR的检测方法.标准曲线在8个浓度梯度间呈现良好的线性关系,扩增效率为97％,组间和组内变异系数均低于2％且无非特异杂峰.敏感性检测显示,荧光定量检测下限为101拷贝/μL,灵敏度比半巢式PCR高10倍.该方法对LCMV、SFTSV及TBEV毒株进行检测,仅TBEV出现特异性扩增.临床样品检测结果显示,荧光定量PCR检出TBEV阳性率为14.2％,比半巢式PCR检测阳性率提高了5.2％,两者检测一致率为63.6％.结果 表明,成功建立TBEV基于SYBR GreenⅡ荧光定量PCR的检测方法,为蜱传病防控奠定基础.