ST融合蛋白的酵母表面展示及其对大鼠小肠黏膜结构的影响

本试验旨在获得能够将大肠杆菌ST融合蛋白展示在酿酒酵母表面的重组酿酒酵母基因工程菌并探究其对大鼠小肠黏膜结构的影响.将estA和estB基因克隆至pYD1质粒中,构建重组质粒pYD1-estA-estB,应用酵母表面展示技术获得EBY-100/pYD1-estA-estB重组酵母基因工程菌.选取36只SPF级SD大鼠,随机分为空白对照组、工程菌组、酵母菌组,分别灌胃生理盐水、工程菌菌液、酿酒酵母菌菌液,持续灌胃21d后连续3d灌胃大肠杆菌H10407菌液,取各组大鼠的十二指肠、空肠、回肠制作切片,观察各段小肠绒毛的长度、宽度、隐窝深度及绒毛长度/隐窝深度(v/o进行统计分析.利用ELISA、real-time PCR技术观察肠道黏膜中的SIgA、IL-2、IL-4和IFN-γ含量变化.结果显示,通过免疫荧光试验证明大肠杆菌ST融合蛋白成功在酿酒酵母表面展示;灌胃21d时,与空白对照组相比,工程菌组及酵母菌组的十二指肠绒毛长度、v/C值显著升高(P＜0.01),工程菌组绒毛宽度显著升高(P＜0.05);空肠绒毛长度、v/c值显著升高(P＜0.01),隐窝深度显著下降(P＜0.05);工程菌组和酵母菌组的回肠绒毛长度及v/c值显著升高(P＜0.01).灌胃大肠杆菌后,各组与灌胃前相比,空白对照组及酵母菌组的十二指肠与空肠绒毛长度、v/c值显著下降(P＜0.01),空肠隐窝深度显著升高(P＜0.01),回肠v/c值显著下降(P＜0.01);工程菌组无明显变化.灌胃21 d,工程菌组与酵母菌组的SIgA、IL-2、IL-4和IFN-γ含量均显著高于空白对照组(P＜0.01);攻毒大肠杆菌后,空白对照组及酵母菌组的SIgA、IL-2和IL-4含量均显著下降(P＜0.01),各组的IFN-γ含量显著升高(P＜0.01).结果表明,EB Y-1 00/p YD 1-estA-estB重组酵母基因工程菌不仅具有酵母菌的益生作用,能促进小肠黏膜发育,而且对产肠毒素大肠杆菌引起的肠道黏膜损伤有一定的保护作用.本试验为新型微生态制剂的研发提供依据.