金标免疫法检测头孢氨苄残留

为了初步研制头孢氨苄胶体金免疫层析试纸条,试验采用柠檬酸三钠还原法制备不同粒径胶体金,摸索制备金标抗体的最适pH值、最适单克隆抗体标记量、金标垫中金标抗体结合量,优化玻璃纤维素膜(NC膜)中C线(羊抗鼠IgG)与T线(CEX-OVA)喷涂量,优化了NC膜封闭液成分,并对试纸条稳定性、灵敏度、特异性进行鉴定.结果表明:金标抗体最适pH值为8.4,最适单克隆抗体标记量为每200 μL胶体金溶液中加入9μL单克隆抗体,金标垫中金标抗体以1.5倍稀释,30 μL/cm喷涂量效果最佳,NC膜C线、T线的最佳喷涂量分别为0.8 μL/cm、0.6μL/cm,封闭液选择3％牛血清白蛋白(BSA)的0.01 mol/L碱性磷酸盐缓冲液(PBS)较合适.经鉴定,该试纸条检测限为500 ng/mL,除了与头孢拉定有轻微交叉反应外,与头孢噻呋、头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻吩、青霉素、链霉素、四环素反应均呈阴性,可在4℃环境中稳定保持180 d.