鸡骨骼肌中天然反义lncRNA VGLL2-AS的鉴定及其与VGLL2的关系研究

旨在探究鸡骨骼肌中VGLL2基因天然反义链转录本VGLL2 AS lncRNA(VGLL2-AS)与VGLL2的关系.本研究首先采用PCR和测序技术验证VGLL2-AS是否存在;之后分别采集不同周龄固始蛋鸡(1日龄、6周龄、16周龄、22周龄、30周龄,每个周龄各6只)组织样,采用荧光定量PCR分析VGLL2基因和其反义链转录本VGLL2-AS的表达谱;采用双向转录试验和核酸酶保护试验检测VGLL2和VGLL2-AS是否可以双向转录且两者之间关系;体外分离培养原代成肌细胞(11胚龄固始鸡胚),然后用2 μg·mL-1 的放线菌素D处理成肌细胞(对照组不做处理),收取处理不同时间点细胞(0～8 h,每组各个时间点各做3个重复),检测VGLL2-AS与VGLL2的半衰期;分离鸡成肌细胞的细胞核和细胞质,通过RT-qPCR方法确定两者的细胞定位;利用PCR扩增及测序对VGLL2的转录本进行验证;最后利用RT-qPCR检测它们在固始蛋鸡胸肌组织(1日龄、6周龄、16周龄、22周龄、30周龄每个周龄各6只)中的时空表达规律和相关性.结果表明,VGLL2-AS在鸡的转录组中真实存在;VGLL2与VGLL2-AS均在肌肉中特异高表达(P＜0.05);VGLL 2-AS与VGLL 2可以进行双向转录且二者之间可以形成双链RNA;VGLL2-AS半衰期较VGLL2长;在成肌细胞中,VGLL2-AS和VGLL 2主要定位于细胞质中(P＜0.001);VGLL 2只存在 VGLL2-mRNA、VGLL2-X2 和 VGLL2-X3 转录本;VGLL2-mRNA 和 VGLL2-X3 与 VGLL2-AS 表达趋势一致,且VGLL2-mRNA、X3和VGLL2-AS的表达呈现极强的正相关(r分别为0.943和0.935,P＜0.01).综上所述,VGLL2-AS作为VGLL2的反义链编码的lncRNA定位于细胞质中,可能通过与VGLL2形成的双链RNA之间的相互作用,然后参与调节VGLL2的表达并维持其稳定性,最终在鸡的早期肌肉发育中发挥重要作用.本研究的结果扩展了鸡中关于NATs的研究,并为鸡VGLL2基因与其天然反义链转录本VGLL2-AS在鸡骨骼肌发育中的生物学功能的研究奠定了基础,对于提高禽类的生长发育具有一定的意义.