c-di-GMP通过趋化调节蛋白CheB/CheR调控钩端螺旋体运动

目的 问号钩端螺旋体(简称钩体)是引起钩体病的重要病原体,人类通过带菌动物尿液污染的疫水或疫土而感染,趋化和运动系统在钩体感染过程中发挥重要作用.钩体基因组序列分析表明其中有数个趋化调节蛋白CheB和CheR的编码基因,但其具体的调控机制未知.方法Real-time PCR检测了钩体基因组中5个基因在钩体感染宿主细胞过程中mRNA的水平变化;T-A克隆了CheB和CheR的编码基因片段并构建了原核表达系统;检测了c-di-GMP浓度变化对CheB和CheR表达菌株表型的影响.结果 在感染细胞60 min后,cheB1的mRNA水平显著提高,cheB3也有一定程度的提高,而cheB2和cheR则无明显差异;成功构建了5个基因的原核表达系统,其中重组CheB1、CheB3和CheR2蛋白使大肠杆菌运动能力明显增强;在加入二鸟苷酸环化酶抑制剂和磷酸二酯酶抑制剂后,各表达菌株形成菌落大小与对照相比无明显不同,但CheB2菌落形态与对照相比出现明显褶皱.结论 CheB和CheR可影响大肠杆菌的swarming运动能力,并受胞内c-di-GMP浓度的影响.