靶向下调Yes相关蛋白抑制喉癌细胞Warburg效应和侵袭能力的研究

目的 探讨靶向下调Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)对Hep-2细胞能量代谢及侵袭能力的影响.方法 构建慢病毒YAP载体下调Hep-2细胞系为下调组,同时建立无处理对照组和空载体组.检测各组细胞葡萄糖及乳酸水平以反映Warburg效应变化情况,通过划痕实验、Transwell实验观察细胞迁移及侵袭情况,利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹试验(Western Blot)技术检测上皮-间叶转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关蛋白vimentin蛋白及E-cadherin蛋白的表达水平.以Graphpad Prism 7.0绘图并进行统计学分析,两组计量资料比较采用t检验.结果 YAP表达下调后,下调组的葡萄糖水平和乳酸水平分别为(18.51±1.72)％、103.40±8.32,均低于对照组[(41.20±1.11)％、743.69±19.49]及空载体组[(39.60±0.78)％、705.22±17.20],差异有统计学意义(葡萄糖水平:t1=19.20、t2=19.34,乳酸水平:t1=52.33、t2=54.56;P值均<0.01).Hep-2迁移和侵袭功能受到显著抑制,下调组细胞划痕愈合能力(44.71±4.68)较对照组(78.32±4.04)及空载体组(77.28±3.11)明显下降(t1=9.42、t2=10.04,P值均<0.01).Transwell实验中,下调组穿过小室的细胞数(33.30±4.19)较对照组(133.71±6.72)及空载体组(126.32±4.21)显著减少(t1=21.96、t2=27.13,P值均<0.01).PCR及Western Blot实验显示,YAP下调后EMT通路的相关蛋白E-cadherin蛋白表达上调(6.16±0.11)、vimentin蛋白表达下调(1.08±0.09),相对于对照组(0.97±0.10、5.67±0.12)及空载体组(1.13±0.09、5.51±0.12)差异具有统计学意义(E-cadherin:t1=35.70、t2=36.28,vimentin:t1=29.91、t2=29.04;以上P值均<0.01).结论 靶向下调YAP通过抑制喉癌细胞Warburg效应及EMT进展,可以减弱喉癌细胞迁移、侵袭能力.