二斑叶螨几丁质酶基因的原核表达及多克隆抗体制备

以制备的二斑叶螨cDNA为模板，克隆二斑叶螨几丁质酶SeChi基因功能结构域催化区片段，大小为786 bp。将该序列片段克隆到表达载体pET-32a (+)中，获得多克隆原核表达载体pET-32a-TuChi。重组质粒经酶切测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3)，经0.6 mmol·L-1 IPTG诱导4 h后高效表达约45 ku可溶性重组蛋白；经His亲和层析洗脱和浓缩获得高纯度的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备TuChi多克隆抗体。制备的多克隆抗体经Western Blot证实能特异性地识别几丁质酶而不与非特异性蛋白结合。ELISA分析表明制备的抗体效价达1??80000，效价较高，为进一步研究二斑叶螨几丁质酶相关功能奠定基础。