内皮祖细胞条件培养基对间充质干细胞增殖和成骨分化的影响及其机制

目的:探讨小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPCs)条件培养基(CM)对同源间充质干细胞(MSCs)增殖和成骨分化功能的影响,并阐明其作用机制.方法:小鼠骨髓细胞经差速贴壁法结合专用培养基分别培养扩增MSCs和EPCs,采用流式细胞术(FCM)检测MSCs和EPCs表面标记物,以成骨、成脂和成软骨诱导分化对MSCs进行功能鉴定,以成血管对EPCs进行功能鉴定.将MSCs分为0％ EPCs-CM组(对照组,采用LG-DMEM培养)、50％ EPCs-CM组(采用50％ EPCs-CM+50％ LG-DMEM培养)和100％ EPCs-CM组(采用100％ EPCs-CM培养).采用MTT比色法检测各组MSCs的增殖活性;采用茜素红染色检测各组MSCs的成骨分化能力.结果:FCM法检测,第3代MSCs高表达Sea-1、CD29,低表达CD45、CD11b;经诱导可向成骨、成软骨和成脂方向分化.第3代EPCs高表达CD34、CD133和VEGFR2;在铺有基质胶的96孔培养板中可形成血管样结构.与对照组比较,50％ EPCs-CM组和100％ EPCs-CM组MSCs增殖活性明显增加,且呈浓度依赖性(P＜0.05).茜草色素红染色法检测,培养21 d后50％和100％ EPCs-CM组MSCs的钙结节数量和钙盐沉积均高于对照组(P＜0.05).结论:利用差速贴壁法可同时分离MSCs和EPCs,EPCs-CM能促进MSCs的增殖和成骨分化.