慢病毒介导的RNA干扰下调TSC2表达对白血病U937细胞系的影响及作用机制

目的 研究下调TSC2基因表达对白血病U937细胞系的生物学作用及其对mTOR通路活性的影响.方法 选择TSC2高表达的U937细胞系,通过慢病毒介导的RNA干扰技术下调TSC2基因表达;采用CCK-8比色法、细胞集落形成实验和流式细胞术检测其对细胞增殖、分化和凋亡的影响;采用Western blot法和实时荧光定量PCR(RQ-PCR)法检测TSC2表达下调对mTOR通路蛋白表达及活性的影响.结果 TSC2基因表达降低能够促进U937细胞的增殖和集落形成(P<0.05);能够使U937细胞G1期[(52.53±3.75)%对(75.10±4.33)%,t=6.829,P=0.002]比例明显降低,G2/M期[(22.43±1.00)%对(15.47±1.20)%,t=-5.581,P=0.019]、S期[(25.03±4.34)%对(14.33±0.91)%,t=-5.413,P=0.013]比例升高;对细胞分化和细胞凋亡没有明显影响(P>0.05).TSC2基因表达下调后,mTOR活性升高,磷酸化的4EBP1和S6K1蛋白活性升高,而AKT蛋白活性没有明显变化;与细胞增殖相关的基因cyclin D1、c-myc表达升高,PTEN基因表达升高,P27KIP基因和凋亡相关基因BCL-XL的表达没有明显的改变.结论 TSC2基因表达下调可以通过调节mTOR通路活性促进白血病细胞的增殖.