钩端螺旋体主要属特异性蛋白抗原分布及其免疫性研究

目的确定致病性问号钩端螺旋体(钩体)属特异性外膜蛋白的抗原性和交叉免疫反应性,为研制通用性钩体基因工程疫苗及检测试剂盒提供依据。方法采用Ni-NTA亲和层析法,提取了4种钩体外膜蛋白主要基因型重组表达产物rLipL21、rLipL32／1和rLipL32／2、rLipL41／1和rLipL41／2、rOmpL1／1和rOmpL1／2,并用SDS-PAGE检测表达及提纯效果。上述重组蛋白常规皮下免疫家兔获得抗血清,显微镜凝集试验(MAT)检测各抗血清交叉凝集效价。采用盐变法提取了我国15群问号钩体参考标准株及非致病的双曲钩体PatocⅠ株的外膜蛋白。以兔抗血清为一抗,采用Western blot检测上述4种外膜蛋白自然表达情况及其免疫反应性。结果rLipL21、rLipL32／1和rLipL32／2、rLipL41／1和r LipL41／2、rOmpL1／1和rOmpL1／2表达量分别约占细菌总蛋白的10％、40％和35％、15％和10％、30％和15％,各重组蛋白SDS-PAGE提纯后均仅见单一的蛋白条带。重组蛋白兔抗血清在同一基因不同基因型表达产物之间有广泛的交叉免疫反应性,与不同钩体血清群的MAT效价为1:2-1:128。各血清群钩体外膜中均可检出上述4种外膜蛋白,但LipL21仅存在于问号钩体中。结论LipL21、LipL32、LipL41、OmpL,1均为钩体属特异性表面抗原,可作为通用性钩体疫苗及检测试剂盒的候选抗原。